技术文章
1、原理及适用范围
肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新出现的食物传播性疾病的病因。它除了引起腹泻、出血性肠炎外,还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国发现因该致病菌引起的食物中毒以来,肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延,相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌O157测试片(FilmplateTM E.coli O157BO204)采用进口高选择性显色培养基作为主要原料,运用微生物测试片专有技术,做成一次性快速检验产品,一步培养15~24h就可确认,大大地简化了检测程序,非常适合各级检验部门和食品企业使用。本品适用于海产品、水产品、各类熟肉制品和冷荤、蛋及蛋制品等的快速检测。参照标准:食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验(GB/T4789.36-2008)。
2、操作方法
2.1、样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液。
2.2、接种:将大肠杆菌O157测试片置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液缓慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s左右使培养基凝固,zui后用手轻轻地压一下,每个稀释度接种两片,同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中,并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
3、结果判读
对测试片进行观察,呈紫红色的菌落为大肠杆菌O157;呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。出现阳性菌落的样本,用其他更为可靠的方法进行验证,没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、报告方式
报告每25g(或25ml)样品中检出或未检出大肠杆菌O157。
5、附加说明
5.1、本品所用培养基已在国外得到比较广泛的应用,有关验证试验表明,接纯菌种可以产生典型的紫红色菌斑,准确率达到98%(K.A. Betheim. 1998. J. Clin. Microbiol.85:425-428)。
5.2、经本公司检测,大肠杆菌O157测试片对纯菌的检测灵敏度为1CFU/mL。
5.3、注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
6、保存条件
本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,在拆封前将整包回温至室温。
北京中诺泰安科技有限公司
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